HepG2.2.15-GFP荧光标记细胞株

产地： 进口、国产

品牌： 抚生

货号： FS-1002

英文名称： HepG2.2.15-GFP荧光标记细胞株

保质期： 详见说明书 个月

保存条件： 低温冷藏

HepG2.2.15-GFP荧光标记细胞株细胞培养方法：

细胞传代：细胞密度达到80-90%时即可传代

①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次；

②加入2ml0.25%胰酶（T25瓶），使胰酶覆盖整个瓶或皿，盖好放入培养箱消化；

③1-2min后，显微镜下观察细胞，若大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入完全培养基终止消化；若细胞还是贴壁，放回培养箱继续消化至可以轻轻吹打下为止；

④将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清；

⑤用新鲜培养基重悬后加入培养瓶或皿中，T25培养瓶加6-8ml培养基；

⑥悬浮细胞直接离心收集，细胞沉淀重悬后分到新培养瓶中。

2、HepG2.2.15-GFP荧光标记细胞株细胞复苏：

①将冻存管在37℃温水中快速摇晃融化，时间1min左右，加入4-5ml培养基混匀。

②在1000RPM左右条件下离心4min，弃上清,加1-2ml培养基吹匀，将细胞悬液加入培养瓶中，补加适量培养基。

3、细胞冻存：待细胞生长状态良好时进行细胞冻存保种

①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次，加入1mL 0.25%胰蛋白酶（T25瓶）

②1-2min后，显微镜下观察细胞，大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入完全培养基终止消化；

③将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清，加1ml冻存液重悬细胞；

④将冻存管放入程序降温盒，放入-80℃冰箱，4小时后将冻存管转入液氮罐储存。

注意事项

一，烧瓶培养的处理程序

在培养瓶中接种细胞并在培养基中完全填充培养基以防止运输过程中细胞的丢失。

1、收到后，目视检查培养物是否有微生物污染的宏观证据。

使用倒置显微镜（配备有相位传感器），仔细检查是否有微生物污染的证据。还检查以确定大多数细胞是否仍然附着在烧瓶底部？在运输过程中，培养物有时被粗略地处理，并且许多细胞经常分离并悬浮在培养基中（但仍然是可行的）。

2、如果细胞仍然附着，无菌去除5至10毫升的运输介质。可以节省运输媒介以重复使用。在5%℃的空气中，在37℃下培养细胞，直到它们准备进行传代培养。

3.如果细胞没有附着，无菌地移除烧瓶的全部内容物，并以1000rpm离心5至10分钟。取出运输介质并保存。在10毫升这种培养基中重新沉淀颗粒细胞并加入25厘米的烧瓶中。在空气中5%℃下，在37℃下孵育，直至细胞准备进行传代培养。

二、传代程序

体积为75厘米的烧瓶。增加或减少其他尺寸培养容器所需的分离培养基的量。

1、去除和丢弃培养基。

2.用0.25%(w/v)胰蛋白酶0.53mM EDTA溶液冲洗细胞层，除去所有含有胰蛋白酶抑制剂的血清痕迹。

3.添加2.0~3.0 ml胰酶-EDTA溶液瓶中，倒置显微镜下观察细胞到细胞层分散（取决于胰蛋白酶的批）。

注意：为了避免结块，不要在击打或摇晃瓶子时搅拌细胞，等待细胞分离。难以分离的细胞可以放置在37°C以促进扩散。

4、加入6～8毫升的完整生长培养基，轻轻吸液，抽吸细胞。

5、在新培养容器中加入适当的细胞悬液等分试样。

6、培养37°C培养基。

推荐栽培比为1:3∶1:4。

介质更新：每周2至3次

三、HepG2.2.15-GFP荧光标记细胞株冷冻保存程序

该协议使用量在75平方厘米的瓶；比例减少或增加的其他尺寸的分离介质的培养容器的数量。

1、去除和丢弃培养基。

2。简要冲洗细胞层0.25（w/v）trypsin0.53mm EDTA溶液去除所有痕迹血清含有胰蛋白酶抑制剂。

3。加入2至3毫升的胰蛋白酶-EDTA溶液瓶中，倒置显微镜下观察细胞到细胞层是分散的（通常在1到10分钟）。

注意：为了避免结块，不要在击打或摇晃瓶子时搅拌细胞，等待细胞分离。难以分离的细胞可以放置在37°C以促进扩散。

4、加入6～8毫升的完整生长培养基，轻轻吸液，抽吸细胞。

5。去除胰酶EDTA溶液，将细胞悬液到离心管和旋转约5 1000rpmfor 10分钟。

6、低温保存培养液中的上清液和复苏细胞。

7、将细胞转移至低温瓶，1ml／瓶。

8、低温容器中的细胞Frozen（NalgENα5100-01）。

甲状旁腺激素相关蛋白抗体 Anti-PTHrP    0.2ml

蛋白酪氨酸磷酸酶-1B/磷酸化酪氨酸抗体 Anti-PTP-1B/pTyr    0.1ml

微白蛋白/细小清蛋白抗体 anti-Parvalbumin  0.2ml

Rad51抗体 Anti-Rad51  0.2ml

维甲酸受体-α 抗体 Anti-RAR-α    0.2ml

维甲酸受体-β抗体 Anti-RAR-β  0.1ml

Ras相关区域家族1A抗体 Anti-RASSF1A  0.2ml

兔抗大鼠sIgA抗体 Anti-Rat IgA  0.2ml

抵抗素抗体 Anti-Resistin  0.1ml

RhoA抗体 Anti-RhoA    0.1ml

Rho相关蛋白激酶1抗体 Anti-ROCK1    0.2ml

Rho相关蛋白激酶2抗体 Anti-ROCK2    0.1ml

RRAD抗体 Anti-RRAD    0.1ml

鼠抗呼吸道合胞病毒单克隆抗体 anti-RSV  0.1ml

新型抑癌基因/一种新发现的抑癌基因抗体 Anti-Runx3  0.1ml

S100B蛋白抗体 Anti-S100B  0.1ml

钙结合蛋白S100A1抗体 anti-S-100A1    0.1ml

突触相关蛋白-1抗体 Anti-SAP-1/FRG4  0.1ml

非典病毒表面蛋白S抗体 Anti-SARS S-protein  0.2ml

干细胞生长因子抗体 Anti-SCF    0.2ml

基质细胞衍生因子-1抗体 Anti-SDF-1/CXCL12    0.1ml

分泌素抗体 Anti-Secretin  0.2ml

分泌素受体抗体 Anti-Secretin receptor  0.2ml

硒蛋白W抗体 Anti-Selenoprotein W  0.1ml

臂板蛋白3A抗体 Anti-Sema3A    0.2ml

臂板蛋白3F抗体 Anti-Sema3F    0.2ml

臂板蛋白4C抗体 Anti-Sema4C    0.2ml

分泌型卷曲相关蛋白1抗体 anti-SFRP1  0.2ml

可溶性糖蛋白C抗体 Anti-SGC    0.2ml

钠-葡萄糖共转运载体1抗体 Anti-SGLT1    0.2ml

HepG2.2.15-GFP荧光标记细胞株shank-1抗体 Anti-Shank1  0.1ml

性激素结合球蛋白抗体 Anti-SHBG    0.2ml

抗猪水肿病大肠杆菌志贺样毒素Ⅱ型突变体抗体 Shiga-like toxin IIe variant subunit A[Escherichia coli]  0.2ml

造血细胞磷酸酶抗体 Anti-SHP-1    0.2ml

蛋白酪氨酸磷酸酶2抗体 Anti-SHP2/PTPN11 0.2ml