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用途范围: 科研实验
品牌: 国产
保质期: 一年
英文名称: E.coli TOP10 Competent Cells
货号: 565522
是否进口:
英文名称E.coli TOP10 Competent Cells
储存条件-70℃保存,液氮保存至少一年,-70℃保存至少6个月
外观(性状)干冰运输,单加10kg干冰费
单位
规格   10×100μl    20×100μl

本公司生产的TOP10感受态细胞是采用大肠杆菌TOP10菌株经特殊工艺处理得到的感受态细胞,可用于DNA的化学转化。使用pUC19质粒检测,转化效率可达108,-70℃保存六个月转化效率不发生改变。

基因型:F_ mcrAΔ(mrr-hsd RMS-mcrBC) φ80 lacZΔM15△lacⅩ74 recA1 deoR araD139Δ(ara-leu)7697 galU galK rpsL (StrR) endA1 nupG

 :一种用于铺制与培养质粒平板和粘粒平板的重级缺陷的抑制型菌株。其中φ80 lacZΔM15基因的产物可与pUC载体编码的β-半乳糖苷酶氨基端实现α-互补,可用于蓝白斑筛选。该菌株适用于高效的DNA克隆和质粒扩增,能保证高拷贝质粒的稳定遗传。

操作方法:(以下各步骤均为无菌操作)

1将感受态细胞置于冰上融化,以下实验以100ul感受态细胞为例。

2、向感受态细胞悬液中加入需转化的目的DNA,注意目的DNA的体积不要超过感受态细胞悬液体积的十分之一,轻轻旋转离心管以混匀内容物,冰浴放置30分钟。

3、将离心管置于42℃水浴中60-90秒,然后快速转移到冰浴中放置2-3分钟,注意不要摇动离心管。

4、向离心管中加入500ul无菌无抗的SOC或LB培养基,37℃ 180rpm振荡培养1小时。目的是使质粒上相关的抗性标记基因表达,使菌体复苏。

5、取适量已转化的感受态细胞涂布含相应抗生素的SOC或LB平板,37℃倒置培养12-16小时。涂布用量可根据具体实验来调整,如转化的DNA总量较多,可取100ul左右的转化产物涂板;反之,如转化的DNA总量较少,可取200-300ul的转化产物涂板。过多菌液可以抑制细菌生长。如果预计的克隆较少,可通过离心后吸除部分培养液,悬浮菌体后将其涂布于一个平板中。涂布剩余的菌液可4℃保存,如果次日的转化菌落数过少可以将剩下的菌液再涂布新的平板。

注意事项:

1、感受态细胞应保存在-70℃,不可反复冻融,否则其转化效率将会降低。

2、实验过程中应严格无菌操作,防止其它DNA或杂菌的污染,避免为以后的筛选、鉴定带来影响。

3、转化时,转化效率与外源DNA的浓度在一定范围内成正比,但当加入的外源DNA量过多或体积过大反而会降低转化效率。转化时DNA体积要小于感受态细胞体积的十分之一。

4、转化率的计算:转化率=产生菌落的总数/铺板DNA总量。

5、为防止转化实验不成功,可以保留部分连接产物,以重新转化,将损失降到*。


公司简介

北京雅安达生物技术有限公司依托*重点实验室建立,是由具有资深生命科学、生物技术背景及留学归国人员共同创办的高新技术企业。公司专业经营生物科学领域的实验仪器、研究试剂和实验室耗材,致力于向国内外生物科学研究人员提供 的服务。目前,公司推出的产品涵盖了生物化学、分子生物学、免疫学、细胞生物学等相关领域,因*稳定、性价比高等特点在广大科研机构、研究院校及相关企业中赢得了良好的声誉,从而建立了立体的营销网络和拥有广泛的 。  公司向广大用户提供*产品的同时,始终将客户服务和技术支持放在比产品销售更重要的位置上,公司聘请了专职、技术支持人员,为客户提供专业性、个性化的技术服务。  公司秉承先做人,后做事的理念,坚持以质量为生命,以客户为中心的宗旨,把 *的产品和 贴心的服务奉献给广大客户。

成立时间: 2011-04-11 企业经济性质: 私营独资企业 年营业额:
注册资金: 200万元(人民币) 经营模式: 生产商, 员工人数: 11-50
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