小牛胸腺DNA D8020；73049-39-5；ctDNA

用途范围：小牛胸腺DNA(CT-DNA)是一种天然的DNA广泛用于研究DNA绑定抗癌剂和DNA绑定代理,调节DNA结构和功能。

纯度：98%

产地：北京

CAS编号： 73049-39-5

品牌：solarbio

规格：50mg

货号：D8020

是否进口：否

产品简介:  

1.            中文名: 小牛胸腺   DNA  

2.            英文名: Calf Thymus DNA  

3.            CAS#: 73049-39-5  

4.            别 名:DNA sodium salt from calf thymus Thymonucleic acid sodium salt

5.            外 观:白色纤维状

6.            特 性:型号:Type I

7.            溶解性:溶于水,参考浓度1mg/ml,4℃条件下轻轻摇晃过夜为佳方法,但不可剧烈              震荡。

8.            S:22-24/25

9.            储存条件:2-8℃

10.        产 地:

11.        说 明:用于DNA相关研究。

制备方法:  

1. 取新鲜(或冰冻)的小牛胸腺,除去血水和结缔组织,在冰浴上切成小块,称取  20g,加入2倍体积的0.1mol/L氯化钠-0.05mol /L,pH=7.0柠檬酸钠缓冲溶液,于组织捣碎机上高速匀浆5分钟。   

2. 组织糜用转速为  3000r/min的      离心机    离心15分钟,将沉淀用50 mL上述缓冲溶液洗涤2次,洗涤时用匀浆器研磨洗涤,每次如前离心。向后得到的细胞核沉淀中加入6倍体积的10%氯化钠溶液,充分搅匀置冰箱中过夜,以充分提取DNP,溶液为粘稠状。将所得的半透明粘稠状液体,用滴管慢慢注入冷      蒸馏    水中,边加边轻轻搅动(NaCl的终浓度为0.14mol/L),这时有白色丝状物——核蛋白析出,在冰箱中静置数小时,收集沉淀。将沉淀物再溶于4倍体积的10%氯化钠溶液中,迅速搅拌以加速溶解。加入1/2体积的氯仿- 异戊醇混合液,剧烈振荡5分钟左右,用转速为3000r/min的离心机离心15分钟,得三层:上层为含有DNA和DNA核蛋白的水层,下层为氯仿-异戊醇的有机溶剂层,变性蛋白质介于两层之间。   

6. 吸出上面的水层,再用氯仿  -异戊醇如前进行脱蛋白,直至界面处不再出现变性蛋白质为止。   

7. 后吸出上清液并将其注入两倍体积的  95%乙醇中,用玻璃棒搅起白色纤维状DNA沉淀,沥干,用80%乙醇洗涤,后用少量无水乙醇洗涤。尽量沥干乙醇后,铺开在表面皿上。置于真空干燥器内干燥,即得白色纤维DNA钠盐。   

注意事项   :  

(  1)由于DNA主要存在于细胞核中,为了便于提取DNA,应严格控制胸腺破碎的条件,既要将细胞膜破碎,又要尽可能避免细胞核被破坏,导致DNA释放而被断裂,。   

(  2)在用氯仿-异戊醇除去组织蛋白时,要剧烈振荡使蛋白变性。若振荡不够,蛋白质不能很好除去,则影响DNA制品的质量。